自噬是細胞內(nèi)進化保守的分解代謝過程。研究發(fā)現(xiàn)，自噬已成為T細胞代謝的關鍵參與者，自噬基因影響T細胞的增殖和存活。一篇文章向大家闡述了自噬的厲害。
思路：

結果：
1.T細胞中Pik3c3的缺失會重新編程基因表達
    條件性敲除T細胞中Pik3c3的小鼠（Pik3c3f/f;Cd4-Cre）表現(xiàn)出嚴重的持續(xù)性炎癥，血清TNF、IFNG /IFN-γ、CCL2 / MCP-1和IL6升高。前期研究發(fā)現(xiàn)這些小鼠表現(xiàn)出T細胞部分丟失，脾臟、肝臟和淋巴結中NK細胞、γδT細胞、DC和B細胞的總百分比增加。RNA測序顯示CD4+T細胞中Pik3c3缺乏誘導89基因上調和1492基因下調，包括Pik3c3，通路富集分析表明在缺乏Pik3c3的CD4+T細胞代謝改變。Pik3c3缺乏的CD8A+T細胞中誘導54基因上調或30基因下調，通路分析發(fā)現(xiàn)細胞代謝未改變，影響最大的通路與唾液分泌、MAPK有關。在CD4+T中，許多代謝相關的基因上調10倍以上， 其他Th細胞轉錄因子的表達無差異。

2.刪除Pik3c3會導致線粒體功能和活化T細胞代謝改變
    抗CD3E和抗CD28抗體刺激脾細胞，Pik3c3缺陷T細胞比例比對照T細胞明顯減少, 表明共刺激Pik3c3缺乏的T細胞導致大量細胞死亡。因為自噬是維持ATP所必需的，接下來通過測量耗氧率（OCR）和細胞外酸化率（ECAR）的變化分析激活T細胞中線粒體呼吸和糖酵解，發(fā)現(xiàn)Pik3c3缺乏降低活化CD4+和CD8A+T中的OCR和ECAR，在CD4+T細胞中減少更為顯著。Pik3c3f/f和Pik3c3f/f;Cd4-Cre小鼠中CD4+或CD8A+ T細胞的激活導致兩種細胞中線粒體染色增加。這些結果表明PIK3C3是T細胞活化過程中維持健康的線粒體負荷必需的，特別是在CD4+T細胞中。

3.T細胞中Pik3c3的缺失抑制Th1細胞分化
    接下來評估Pik3c3缺陷是否調節(jié)Th細胞分化。不同極化條件下培養(yǎng)分選的Pik3c3缺乏和完整的CD4+SELL/CD62L+T細胞，抗CD3E抗體重新激活細胞，發(fā)現(xiàn)在不同極化條件下培養(yǎng)的幼稚CD4+T細胞在刪除Pik3c3時對細胞死亡具有不同敏感性。在Th1細胞條件下，在缺乏Pik3c3時IFNG產(chǎn)生的比例減少，Th2、Th17和Treg條件下培養(yǎng)的細胞無差異。

4.T細胞中Pik3c3缺乏抵抗EAE誘導
    由于缺乏Pik3c3的CD4+T細胞經(jīng)歷嚴重的凋亡，并表現(xiàn)激活后靜態(tài)表型以及未能分化為Th1細胞，推測Pik3c3缺失會抑制自身免疫反應的發(fā)展。采用多發(fā)性硬化癥的EAE模型測試T細胞中Pik3c3缺失是否導致EAE誘導的抗性。結果顯示pik3c3f/f;Cd4-Cre小鼠能完全抵抗EAE，MOG特異性IFNG+CD4+T細胞大大減少，IL17+CD4+T細胞也減少。BECN1-PIK3C3復合體在經(jīng)典自噬和LAP途徑 至關重要。為排除Pik3c3缺失介導的EAE耐藥涉及LAP的可能性，研究rubcn-/-小鼠發(fā)展EAE的能力。所有rubcn-/-小鼠有EAE體征出現(xiàn)。繁殖誘導刪除Pik3c3的pik3c3f/f; Rosa26-CreERT2小鼠，4-OH他莫昔芬處理ER-Cre+細胞保護EAE。老鼠接受4-OH他莫昔芬處理的ER-Cre +細胞過繼轉移表達明顯降低CNS浸潤的PTPRCb CD45.2+細胞和CD4+T細胞的比例。這些數(shù)據(jù)表明PIK3C3在自身免疫反應的誘導和效應階段起關鍵作用。

5. T細胞特異性Pik3c3缺失未改變腫瘤轉移
    為確定Pik3c3在腫瘤轉移中的重要性，在Pik3c3f/f和pik3c3f/f;Cd4-Cre小鼠注射肺癌細胞或B16黑色素瘤細胞，并監(jiān)測肺腫瘤定植。Pik3c3f/f小鼠具有類似的LLC和B16黑色素瘤腫瘤負擔，pik3c3f/f; Cd4-Cre小鼠中CD4+T細胞、CD8A+T、MDSCs和CD8A+T細胞的頻率降低，CD44+SELL-T細胞頻率增加。Pik3c3缺乏并未改變PTPRC/CD45+細胞的抗LLC腫瘤功能。這些表明，T細胞中Pik3c3的缺失限制效應細胞清除腫瘤轉移的功能。